ISO 21149

La norme ISO 21149, qui comprend des méthodes d'essais pour le dénombrement et la détection des bactéries mésophiles aérobies dans les produits cosmétiques, donne deux lignes directrices différentes :

- par comptage des colonies sur milieu gélosé après incubation aérobie ou
- vérification de l'absence de croissance bactérienne après enrichissement. par

Méthode générale selon la norme ISO 21149 ; Il s'agit de dénombrer les colonies en fonction de la présence ou de l'absence de croissance bactérienne sur un milieu gélosé non sélectif ou après enrichissement.

L'inhibition possible de la croissance microbienne par l'échantillon doit être neutralisée pour permettre la détection de micro-organismes viables. Dans tous les cas et quelle que soit la méthodologie, la neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit doit être vérifiée et confirmée.

Une autre méthode est le "Comptage sur plaque"
Le comptage sur plaque comprend les étapes suivantes :
⎯ Préparation de plaques coulées ou de plaques de frottis à l'aide d'une culture spécifique milieu et Ensemencement des boîtes à l'aide d'une quantité définie de suspension initiale ou de dilution du produit.
⎯ Incubation aérobie des boîtes à 32,5 °C ± 2,5 °C pendant 72 heures ± 6 heures.
⎯ Nombre de colonies formant des unités (UFC) comptant et calculant le nombre de bactéries mésophiles aérobies par millilitre ou gramme de produit.

Troisième méthode "Filtration sur membrane"
La filtration sur membrane comprend les étapes suivantes :
⎯ Ajouter une quantité appropriée de l'échantillon validé à une petite quantité de diluant stérile approprié. dans l'appareil de filtration humidifié avec de l'eau, égoutter immédiatement et laver selon la procédure validée (voir 13.3.4). Transférer le filtre à membrane à la surface du milieu gélosé spécifié comme spécifié dans la norme ISO 21148.
⎯ Incubation aérobie des membranes à 32,5 °C ± 2,5 °C pendant 72 heures ± 6 heures.
⎯ Unités formant des colonies Compter le nombre d'UFC et calculer le nombre de bactéries mésophiles aérobies par millilitre ou gramme de produit.

La quatrième méthode est la « Détection des bactéries par enrichissement »
La détermination des bactéries par enrichissement comprend les étapes suivantes :
⎯ 32,5 °C ± 2.5 Incubation d'une quantité définie de suspension de départ pendant au moins 20 heures à °C dans un milieu liquide non sélectif contenant des neutralisants et/ou des agents dispersants appropriés.
⎯ Transfert d'une quantité spécifiée de la suspension précédente sur des milieu gélosé solide sélectif.
⎯ Incubation aérobie de 48 heures à 72 heures à 32,5 °C ± 2,5 °C.
⎯ Détection de la croissance des bactéries mésophiles aérobies par S échantillon de produit et expression des résultats en "présence /absence".